即時熒光定量PCR

即時熒光定量PCR

技術原理

即時熒光定量PCR（Real-time Quantitative PCR）結合傳統聚合酶鏈反應的擴增與螢光偵測。試劑中加入螢光染料（如SYBR Green）或TaqMan探針，在每個循環延伸阶段荧光强度随目标DNA拷贝数上升，即时记录荧光线，可透过标准曲线或ΔΔCt进行绝对或相对定量。

主要应用

• 基因表达分析：以逆转录PCR得到的cDNA为模板，比较不同处理间表达差异。
• 病原体检测：实现单拷贝级别的高灵敏度检测。
• 基因编辑验证：评估CRISPR/Cas9编辑后突变频率。

優勢與限制

相较传统PCR，实时荧光定量具备高灵敏度、宽动态范围及闭管操作优势，防止交叉污染。但需严格引物设计，避免非特异性扩增导致误差。